以潮霉素抗性为选择标记的稻瘟病菌原生质体转化

稻瘟病菌对潮霉素（ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ，简写为ＨｍＢ）较为敏感，当不含无机盐的再生培养基中ＨｍＢ浓度达到１００μｇ／ｍｌ时，稻瘟病菌２５３９ｗ原生质体的再生即被完全抑制。我们利用带有ＨｍＢ抗性基因的质粒（ｐＡＮ７－１），通过ＰＥＧ②融合法对其原生质体进行转化，获得了ＨｍＢ抗性转化子。转化子以两类形式出现：一类为大而生长稳定的菌落，另一类为小而生长不稳定的菌落，两类菌落产生频率分别为每μｇＤＮＡ３－４个和１０－２０个。将大菌落转化子转接到含有ＨｍＢ的新培养基上，仍可正常生长，但小菌落转化子却不能，说明前者为真正的转化子而后者为流产转化子。ＤＮＡ杂交分析显示转化是由于质粒ＤＮＡ整合到了２５３９ｗ的染色体ＤＮＡ上，整合可在染色体ＤＮＡ的不同位点上发生。受试的７个转化子尽管各自的整合形式不同，但均在选择与非选择性培养中保持稳定。