一种高特异性的改良降落PCR(英文)

被引：5

作者：

张贵星

袁保梅

许培荣

王建民

薛乐勋

机构：

[1] 郑州大学医学院生物工程实验室

[2] 郑州大学医学院生物工程实验室中国河南郑州　

[3] 中国河南郑州　

来源：

生命科学研究 | 2002年 / 04期

关键词：

降落PCR; PCR特异性; PfuDNA聚合酶;

D O I：

10.16605/j.cnki.1007-7847.2002.04.008

中图分类号：

Q503 [生物化学技术];

学科分类号：

摘要：

为提高基因组DNA中的基因PCR检出的特异性,设计了一种改良的降落PCR程序,并分别用TaqDNA聚合酶及高保真PfuDNA聚合酶进行实验.自盐藻Dunaliellabardawil中提取基因组DNA作为PCR模板,使用TaqDNA聚合酶及PfuDNA聚合酶,运用普通PCR和降落PCR程序,扩增胡萝卜素生物合成相关基因(cbr)上游启动子序列,并电泳比较PCR扩增产物的特异性.结果显示,使用普通Taq酶PCR,普通PCR程序产生200bp,500bp和1272bp长的三条带,而TD PCR程序仅克隆出1272bp的特异带;利用高保真的PfuDNA聚合酶作PCR,在TD PCR泳道中仅有1272bp一条带,而普通PCR除了1272bp的特异带外,还出现一条500bp的非特异带.无论使用普通Taq酶或高保真酶Pfu,改良的降落PCR程序均明显提高PCR的特异性,类似的降落PCR程序可望用于克隆用普通PCR难以克隆的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性.

引用

收藏

页码：314 / 317

页数：4

相关论文

共 3 条

[1]

Polymerase chain reaction 5 strategy. ARNHEIM N,ERLICH. H. Annual Review of Biochemistry . 1992

[2]

Maximixing sensitivity and specificity of PCR by pre-amplification heating. AQUILA R T,BECHTEL L J,VIDELER J. A,et al. Nucleic Acids Research . 1991

[3]

Co-regulation of a gene homologous to early light-induced genes in higher plants andβ-carotene biosynthesis in the alga Dunaliella bardawil. LERS A,LEVY H,ZAMIR A. Journal of Biological Chemistry . 1991