白喉毒素/IL-6的高效表达及细胞毒作用的研究附视频

白喉毒素是由携带β噬菌体基因组的白喉杆菌产生的由５３５个氨基酸组成的单链外毒素，毒性极强，１～２个分子即可灭活１个真核细胞，肿瘤细胞对它尤为敏感。在骨髓瘤、原发性肝癌等肿瘤细胞表面，ＩＬ－６受体可过度表达，利用受体与配体的特异性结合，可将细胞毒性药物定向导入肿瘤细胞。基于上述理论，用ＩＬ－６ｃＤＮＡ取代白喉毒素的受体结合区，构建了白喉毒素／ＩＬ－６融合蛋白表达载体ｐΔＤＴ／ＩＬ－６。ＩＰＴＧ诱导后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果显示，在６４ｋＤ处，有一明显产物带，该产物即能与白喉毒素单抗结合而显色，又能与ＩＬ－６单抗结合。表达量在菌体蛋白的２０％以上。经初步纯化后，ＩＬ－６受体竞争性结合实验及细胞毒性实验表明，该融合蛋白对表面有大量ＩＬ－６受体的骨髓瘤细胞Ｕ２６６有较强的细胞毒作用；而ＩＬ－６受体较少的正常细胞对其有一定的耐受作用。