芒果生长素反应因子类蛋白的cDNA克隆和表达

通过SSH法获得了一个与不定根形成相关的差异表达的cDNA片段 ,其推导的氨基酸序列与拟南芥的生长素反应因子 (ARF)类蛋白具有较大的同源性 ,因此将它命名为MiARF。用所设计的基因特异引物进行 3′RACE扩增获得包含完整读码框架 (ORF)的MiARF1(GenBank登录号为AY2 5 5 70 5 )和MiARF2 (GenBank登录号为AY30 0 80 8)。MiARF1全长为 32 72bp ,其中 ,ORF含 2 5 2 3bp ,5′非翻译区 (5′UTR)含 2 85bp ,3′非翻译区 (3′UTR)含 4 6 4bp。由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2 (BAB10 16 2 )的ID值为 6 4 % ,E值为 0 ,在DNA结合区域 (DBD)、III和IV区域的同源性更高 ,ID值均大于 80 %。MiARF2cDNA全长为 14 74bp ,其中ORF含 981bp ,5′非翻译区含 2 85bp ,3′非翻译区含 2 0 8bp ,由该序列所推导的氨基酸序列与拟南芥ARF2 (BAB10 16 2 )的ID值为 84 % ,E值为e- 1 51 。MiARF2仅具有DBD保守区并与MiARF1的基本相同 ,但缺乏III和IV区域。VirturalNorthern杂交表明 :MiARF2在生根的组织中表达水平高 ,而在非生根的组织中未见表达 ;MiARF1在生根及非生根的组织中均有表达。