禽流感病毒HA基因真核表达质粒的构建与表达

被引：18

作者：

张强哲

秦曦明

梁荣

邓明俊

何宏轩

张彦明

郑昌学

段明星

机构：

[1] 西北农林科技大学动物科技学院

[2] 清华大学生物科学与技术系

[3] 生物膜与膜生物工程国家重点实验室

来源：

生物化学与生物物理进展 | 2003年 / 03期

关键词：

禽流感病毒; HA基因; 真核表达质粒; 表达; 生物活性;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.65 [家畜病毒学];

学科分类号：

摘要：

血凝素蛋白 (HA)基因是禽流感病毒 (AIV)重要的保护性抗原基因 .为了研究HA基因疫苗 ,用PCR扩增H5亚型AIVHA基因 ,将其克隆到质粒 pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒 pC4H5和pCMVH5 .采用TfxTM 2 0、Superfect转染试剂和电转染法转染HeLa细胞 ,转染后的HeLa细胞经蛋白质印迹和血凝试验检测HA蛋白及其活性 .结果表明 ,Superfect转染和电转染均能正确表达HA蛋白并具有生物学活性 ,蛋白质印迹检测到HA和HA裂解的HA1和HA2 ,与AIV的HA、HA1、HA2蛋白的分子质量一致 .从血凝试验结果看 ,Superfect和电转染表达的HA均具有血凝活性 ,而经Superfect转染的 pC4H5的表达量是pCMVH5的8倍 ,表明 pC4H5是一高效的真核表达质粒

引用

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