铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药表型与外排泵表达水平的关系题录附视频

目的了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,Pa）临床菌株外排泵抑制剂对碳青霉烯类抗生素活性的影响;探索铜绿假单胞菌对亚胺培南（IMP）和美罗培南（MEP）的耐药性与其外排泵表达水平关系。方法对 IMP 耐药的 Pa 采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂 carbonylcyanide m-chlorophenylhydrazone（CCCP,107株）与 Phe-Arg-β-naphthylamide（PAβN,71株）的抑制试验,观察 IMP 和 MEP 的 MIC 变化;对32株对 IMP和MEP不同耐药表型的 Pa,采用实时荧光定量PCR 法检测3种外排泵基因（mexA、mexD、mexF）的表达量。结果联合外排泵抑制剂后,IMP、MEP耐药率与之前相比差异均无统计学意义,其中 IMP 联合 CCCP、PAβN前后耐药率 X2值分别为0.338和0.086,P>0.05;MEP 联合 CCCP、PAβN前后耐药率 X2值分别为1.065和1.458,P>0.05。MIC 值没有变化的菌株占50%以上;仅8株 Pa 的 MIC 值降至原MIC值的1/4。在27株碳青霉烯类耐药Pa株中,24株（88.9%）存在外排泵高表达;其中3种外排泵（MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN）均高表达的菌株数量最多,13株,占54.2%。MexAB-OprM和 MexCD-OprJ 同时高表达以及MexAB-OprM 和 MexEF-OprN 同时高表达菌株分别有3株,各占12.5%。仅 MexEF-OprN 高表达及仅 MexAB-OprM 高表达的菌株分别为2株,各占8.3%;未见仅 MexCD-OprJ 高表达者。3种外排泵基因 mexA、mexD、mexF 在对 IMP 及 MEP 均敏感的菌株中表达水平分别为0.48±0.48、0.48±0.53和0.30±0.41,与碳青霉烯类耐药组之间差异均有统计学意义（P<0.05）,碳青霉烯类耐药组的表达水平高于对IMP及MEP均敏感组的表达水平。MexA的表达水平在IMP、MEP均耐药组和IMP耐药、MEP敏感组间差别有统计学意义,前者高于后者。结论当外排泵抑制剂CCCP和PABN浓度分别为5μg/ml和20μg/ml 时,对碳青霉烯类抗 Pa 活性影响较小,不能明显增强其对耐药菌的抗菌活性。MexAB—OprM 的高表达与 MEP 耐药性有关,而MexCD-OprJ和MexEF-OprN的高表达与IMP耐药性有关,与MEP耐药性的关系尚有待进一步研究。