三重PCR鉴定消毒牛奶及其加工环境中的单核细胞增生李斯特菌

目的建立三重PCR体系用于鉴别消毒奶及其加工环境中的单核细胞增生李斯特菌。方法以李斯特菌属细菌中共有的编码P60蛋白的iap基因和单核细胞增生李斯特菌特有的编码溶血素的hly基因为靶目标设计引物,用于三重PCR扩增。结果李斯特菌属细菌的iap基因在二重PCR的扩增片断为1.45 kb,单核细胞增生李斯特菌溶血素的hly基因的扩增片断为420bp;在三重PCR体系中单核细胞增生李斯特菌除了扩增到420 bp的hly基因片断以外,iap基因以700 bp的小片断取代了1.45 kb的大片段,而同属的其他细菌仍旧扩增iap基因1.45 kb的大片段。结论所建立的三重PCR法能扩增出李斯特菌属细菌的预期条带,此方法对肉汤培养物的检测灵敏度为3.2×101cfu/m l,对人工污染牛奶的检测灵敏度为1.4×102cfu/m l,高水平L.innoc-ua(108cfu/m l)共存不影响单核细胞增生李斯特菌的特异性检出。三重PCR还可以直接鉴别出培养3～6小时后的含有单核细胞增生李斯特菌(1.45×100～1.45×101cfu/m l)的牛奶。