应用抑制性差减杂交技术构建铁皮石斛差减cDNA文库的探讨

被引:3
作者
魏小勇
机构
[1] 广州中医药大学组胚教研室广州
关键词
石斛碱/生物合成; 差减cDNA文库; 抑制性差减杂交; 铁皮石斛;
D O I
10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2005.04.020
中图分类号
R282.5 [药材鉴定];
学科分类号
1008 ;
摘要
[目的]探讨构建铁皮石斛抑制差减文库的方法,为克隆石斛碱生物合成相关功能基因奠定基础。[方法]采用抑制性差减杂交(SSH)技术,分别以4年生和1年生铁皮石斛叶片互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为检测子(tester)与驱赶子(driver),将所获得差减cDNA片段克隆入质粒表达载体(PointTMXa-1T-Vector),转化大肠杆菌JM109,聚合酶链反应(PCR)扩增鉴定插入片段。[结果]成功地构建了与石斛碱生物合成相关的差减cDNA文库,获得的正、反向差减文库分别含560、220个重组子;插入片段的平均大小为550bp。[结论]所构建的差减cDNA文库适合进一步克隆分析石斛碱相关功能基因研究。
引用
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页码:320 / 322+326 +326
页数:4
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共 2 条
[1]  
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[2]  
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