转基因克隆奶山羊大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白质(rhATⅢ)

被引：21

作者：

邹贤刚 ^{[1
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袁三平 ^{[1
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鲜建 ^{[1
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赵雅琳 ^{[1
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李狄尔 ^{[1
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王玉阁 ^{[2
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郝茹 ^{[2
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解居伦 ^{[1
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刘身庆 ^{[1
]}

杜淼 ^{[2
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机构：

[1] 青岛森淼生物技术研究所

[2] 中国科学院遗传和发育生物学研究所

来源：

生物工程学报 | 2008年 / 01期

关键词：

山羊; 乳腺生物发应器; 转基因; 克隆; 重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ); 胎儿成纤维细胞(FFC);

D O I：

10.13345/j.cjb.2008.01.013

中图分类号：

Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

利用转基因克隆奶山羊乳腺生物反应器大量生产重组人的抗凝血酶Ⅲ(rhATⅢ)蛋白质。其中包括:筛选出人的抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的cDNA序列;利用山羊的β-酪蛋白基因的启动区,终止信号和Enterokinase蛋白酶酶切DNA序列,构建在乳腺中特异表达rhATⅢ的表达载体。同时在转基因载体的末端连接一个新酶素筛选基因(Neomycin)。再以细胞转染、G418筛选和体细胞核移植(动物克隆)等过程,最后获得含有人的抗凝血酶Ⅲ基因的转基因克隆奶山羊。我们共获得了5个原代转基因公羊。第一只克隆羊在出生后78 d死亡,解剖表明:羊的肺部和肾脏等器官有异常。其它克隆公羊经过与崂山种母羊交配,得到转基因后代,其中两个原代转基因羊的后代母羊已成熟、所获得的奶经蛋白质电泳证明:转基因克隆羊后代奶中含有约60 kD大小的rhATⅢ糖蛋白;经Elisa检测表明:在奶中含有大量活性的rhATⅢ,在来源于两个不同克隆公羊的后代母羊奶中的rhATⅢ含量分别为0.4mg/L和3 g/L。此研究证明:转基因奶山羊可以大量地生产具有很高活性的rhATⅢ。用这种方法生产的rhATⅢ通过蛋白质提纯,制成注射针剂,将可用于人的抗凝血酶Ⅲ缺乏症的治疗、预防血栓和重大手术过程中的止血的作用等。

引用

页码：117 / 123

页数：7

共 7 条

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