光敏核不育水稻光敏色素基因的RFLP分析

以籼稻“ＩＲ３６”（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ｓｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）光敏色素基因ｐｈｙＡ 的ｃＤＮＡ 克隆作探针，对光敏核不育水稻“农垦５８Ｓ”和对照水稻“农垦５８”（Ｏ．ｓａｔｉｖａ Ｌ．ｓｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）进行ＲＦＬＰ分析，限制性内切酶Ｅｃｏ ＲⅤ、ＤｒａⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＸｂａⅠ、ＭｓｐⅠ等都没有显示出多态性，而用ＨｐａⅡ显示出了多态性。ＭｓｐⅠ和ＨｐａⅡ是一对同裂酶（识别位点为ＣＣＧＧ），但二者对识别位点上第２个胞嘧啶（即ＣｐＧ）甲基化的敏感性不同。实验结果表明，“农垦５８Ｓ”ｐｈｙＡ 基因中ＣｐＧ甲基化程度低于“农垦５８”，即在“农垦５８Ｓ”ｐｈｙＡ 基因中某些ＣｐＧ 发生了脱甲基化。此外，以“ＩＲ３６”、“农垦５８”、“农垦５８Ｓ”的ＤＮＡ 作模板，用ＰＣＲ方法在ｐｈｙＡ 基因转录起始位点上游扩增出一大小均为０．４ ｋｂ 的ＤＮＡ片段（称为ＰＣＲＦ）。测序结果表明，“农垦５８Ｓ”的ＰＣＲ２ 比“ＩＲ３６”的ＰＣＲ１ 多一个碱基，且另有８ 个碱基不同。以“ＩＲ３６”的ＰＣＲＦ作探针进行ＲＦＬＰ分析，在“农垦５８Ｓ”和“农垦５８”中杂交得到的片段都不同于“ＩＲ３６”中得到的片段。根据“ＩＲ３６”ｐｈｙＡ基因