敲低CD2AP基因表达对足细胞增殖和分裂的影响

被引：7

作者：

张春 ^{[1
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姜华军 ^{[1
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常莹 ^{[2
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朱忠华 ^{[1
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刘建社 ^{[1
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邓安国 ^{[1
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机构：

[1] 华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科

[2] 同济医院肝病研究所

来源：

中华肾脏病杂志 | 2007年 / 12期

关键词：

CD2相关蛋白; 增殖; 有丝分裂; 足细胞;

D O I：

暂无

中图分类号：

R686 [筋腱、韧带、滑囊疾病及损伤];

学科分类号：

100220 [骨科学];

摘要：

目的观察敲低CD2相关蛋白（CD2AP）基因表达对足细胞增殖和分裂的影响。方法采用RPMI 1640培养基,在33℃培养永生化小鼠足细胞系。以PKH-26红色荧光染料标记足细胞后,用Metafectene转染试剂转染针对CD2AP的小分子干扰RNA（siRNA）。转染24 h后以流式细胞仪检测转染效率;48 h后用RT-PCR和Western印迹检测转染后CD2AP mRNA和蛋白表达情况;72 h后以流式细胞仪检测足细胞增殖指数及细胞周期;用Oregon Green?488标记的Paclitaxel直接标记足细胞内的微管蛋白;用激光共聚焦显微镜检测双核及多核足细胞的比例。结果流式细胞仪结果显示,CD2AP特异性siRNA转染效率为66.27%。转染siRNA 48 h后,CD2AP mRNA和蛋白表达分别下降57%和39%。转染72 h后,足细胞增殖指数显著下降（P<0.05）,G2/M期的细胞数量显著增多（P<0.05）。共聚焦显微镜下可见转染CD2AP siRNA后,部分细胞有丝分裂后不能分离,双核及多核足细胞的比例显著增加（P<0.05）。结论敲低CD2AP基因的表达能阻碍细胞有丝分裂后期的细胞分离,抑制足细胞的增殖能力。

引用

共 3 条

[1]

Serum decreases the size of Metafectene-and Genejammer-DNA complexes but does not affect significantly their transfection activity in SCCVII murine squamous cell carcinoma cells[J] Cellular & Molecular Biology Letters 2006,

[2]

Development of a novel flow cytometric cell-mediated cytotoxicity assay using the fluorophores PKH-26 and TO-PRO-3 iodide[J] Alice E Lee-MacAry;Elizabeth L Ross;Derek Davies;Ruthline Laylor;Jamie Honeychurch;Martin J Glennie;David Snary;Robert W Wilkinson Journal of Immunological Methods 2001,

[3]

Rearrangements of the Cytoskeleton and Cell Contacts Induce Process Formation during Differentiation of Conditionally Immortalized Mouse Podocyte Cell Lines[J] Experimental Cell Research 1997,

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