枯草杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆及表达

以质粒ｐＵＣ１８为载体，从枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＢ１０４基因组中克隆到一个内切葡聚糖酶基因。限制酶切分析表明重组质粒中的插入片段为３５ｋｂ，其中各含有一个ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＰｖｕⅡ位点。该插入片段含有一完整的内切葡聚糖酶基因，其自身启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。当加入ｌａｃＺα基因启动子的诱导物ＩＰＴＧ后，内切葡聚糖酶表达量提高２８倍。加入０５％葡萄糖能抑制该基因的表达。该基因在大肠杆菌ＤＨ５αＦ′中表达的内切葡聚糖酶分布为：胞外６７３％，胞间周质３９％，胞内２８８％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该插入片段来自供体菌Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。