地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶基因的克隆、序列测定及其表达

被引：7

作者：

洪扬

雷虹

赵玉风

韩玉珉

申同健

机构：

[1] 中国科学院生物物理研究所二室

[2] 中国科学院生物物理研究所二室北京

[3] 北京

[4] 北京

来源：

生物工程学报 | 1994年 / 03期

关键词：

地衣芽孢杆菌; 碱性蛋白酶基因; 克隆; DNA序列分析; 表达;

D O I：

10.13345/j.cjb.1994.03.012

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

以克隆的地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增片段为探针,通过原位杂交从2709基因文库中筛选出两个含有完整的2709碱性蛋白酶基因的阳性克隆:pSC1和pSC7。对pSC7中的插入片段构建若干亚克隆后测定了其全部DNA序列,结果显示该插入片段含2709碱性蛋白酶及其信号肽与导肽(Pro-peptide)在内的全部编码序列(1140碱基对)及长度分别为299和832碱基对的上、下游序列,该序列同M.Jacobs等克隆的地衣芽孢杆菌NCIB6816的Subtilisin Carlsberg基因序列显示了极高的同源性。通过枯草杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBE2将克隆的2709碱性蛋白酶基因转入到蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌DB104中,结果表明2709碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中得到了明显的表达。

引用

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