中国春Ph1基因的RAPD标记鉴定

用260个10bp随机引物对中国春（CS）、ph1b突变体及其F2分离群体基因组DNA进行RAPD分析，筛选出两个特异的RAPD标记OPR7936和OPR17524。经Southern分析，并结合减数分裂MI染色体配对分析，认为这两个RAPD标记位于5BL染色体ph1b基因缺失区中，可以作为ph1b基因的分子标记。经过连锁分析，测得OPR7936与Ph1基因之间的距离为11．4cM，OPR17524与Ph1基因之间的距离为5．0cM，均位于Ph1基因的远着丝粒端。测序后，经同源性比较发现这两个DNA序列可能是Ph1b基因区中的两个不同位点上的新序列，并有可能成为Ph1基因区图谱新的探针。根据这两个PAPD克隆片段的两端序列，分别设计出一对24bp的SCAR引物，可特异扩增Ph1基因的一条带（SCR7823和SCR17403），而ph1b基因缺少各自的特征带，其扩增产物无需电泳分离，只需在反应管中加入溴化乙锭，紫外灯下直接根据荧光反应即可鉴定出ph1b基因型，为今后ph1b基因的转育进行标记辅助选择又提供了两个易于操作、有效的分子标记。