链替换技术提高抗角蛋白人Fab抗体的亲和力附视频

目的　通过链替换技术对一株人源性抗角蛋白Fab单抗进行体外亲和力成熟。方法分离、扩增多样性人免疫球蛋白轻链基因和IgG IgM重链Fd段基因 ,分别构建轻链库和重链库。先以原始克隆的重链与轻链库随机搭配进行轻链替换 ,对形成的换链库采用解离速率筛选法 (off ratese lection)选取亲和力提高的克隆 ;然后再将获得的轻链基因与重链库基因重组进行重链替换 ,筛选亲和力进一步提高的克隆并进行亲和力测定、可变区基因序列分析等一系列鉴定。结果　替换轻链后所获抗体的亲和力提高到原来的 10倍 ;替换重链后亲和力进一步提高达到 7.9× 10 1 0 mol L ,是原始克隆的近 2 3倍。结论　链替换技术是提高抗体库中所获Fab抗体亲和力的有效手段。