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短发夹RNA介导RNA干扰的时间和剂量效应研究
被引：13
作者：
何国平
张思仲
王英成
肖翠英
马用信
许文明
丁兰
陶大昌
孙岩
陈玉娟
机构：
[1] 四川大学华西医院医学遗传学研究室
[2] 四川大学华西医院精神科实验室
[3] 四川大学华西医院医学遗传学研究室 人类疾病基因组学研究室
[4] 人类疾病生物治疗国家重点实验室
[5] 成都
[6] 人类疾病基因组学研究室
来源：
关键词：
RNA干扰;
短发夹RNA;
报告基因;
共转染;
时间和剂量效应;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q78 [基因工程（遗传工程）];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
用RNA干扰(RNA interference,RNAi) 技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中RNAi作用的剂量和时间效应. 应用Lipofectamine 2000将外源报告基因的表达载体与编码短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA) 的质粒共转染HEK293H细胞,观察shRNA载体对报告基因的抑制效应. 转染后,shRNAs的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达. 在共转染后12,24,48,60,72,96 h时检测EGFP (enhanced green fluorescent protein,EGFP) 基因mRNA及蛋白质表达水平,结果显示,EGFP mRNA及蛋白质表达在12 h时略有降低,24～48 h时表达逐渐降低,48～72 h时降低最明显,其后EGFP表达水平逐渐恢复. 提示该过程中RNAi效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势. 共转染一系列剂量比例的EGFP干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内,RNA干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一“平台期”. 此外,通过RNAi 抑制HeLa细胞、HEK293细胞中荧光素酶基因的表达,荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应. 这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的RNAi作用呈现剂量和时间依赖性效应. 这为基于载体表达的RNAi技术应用研究提供了一定的理论
引用
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页数：10
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