新型Smad7重组腺病毒载体的构建

被引：5

作者：

陈颖伟

胡良凯

陈源文

李定国

机构：

[1] 上海第二医科大学新华医院消化内科

[2] 上海第二医科大学新华医院消化内科上海

[3] 上海

来源：

上海第二医科大学学报 | 2004年 / 06期

关键词：

Smad7; 腺病毒载体; TGF-β; 信号转导;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的构建鼠Smad7重组复制缺陷型腺病毒载体(AdSmad7)。方法采用常规分子生物学方法,抽提SD大鼠肝脏总RNA,RT-PCR获得鼠Smad7 cDNA片段,插入腺病毒穿梭载体质粒pAdDTrack CMV启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-Smad7,线性化后与腺病毒骨架载体质粒AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组,鉴定后在HEK293细胞包装成重组腺病毒AdSmad7。RT-PCR检测AdSmad7在HEK293中的表达情况。结果该重组缺陷型腺病毒载体经测序、限制性内切酶酶切分析、PCR等鉴定,与预期结果一致;重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后3 d可观察GFP明显表达;RT-PCR检测证实Smad7表达增强。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可快速构建同时表达GFP和Smad7的重组复制缺陷型腺病毒AdSmad7,为进一步研究TGFβ信号转导和肝纤维化的基因治疗奠定基础。

引用

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