基于NLRP3炎症小体研究白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

目的 研究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）对白念珠菌异常定植下的葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt,DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）的治疗作用，以及对Dectin-1/脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法 将105只C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS+白念珠菌组及BAEB低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组和美沙拉嗪（200 mg/kg）组。对照组小鼠每日自由饮水；DSS组予3%DSS溶液，自由饮用连续7 d；其他组在DSS组基础上，在第1、3、5、7天ig白念珠菌（1×108 CFU/只）。第8天开始分别ig相应药物，1次/d，连续7 d。每天称定小鼠质量，观察一般状态，收集粪便，采用平板培养法检测粪便真菌载荷。末次给药次日，处死小鼠，测量结肠长度，苏木素-伊红（HE）染色法进行结肠组织学分析；ELISA法检测结肠组织炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18水平；免疫组化法检测结肠组织Occludin和闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达；Western blotting检测结肠组织Dectin-1、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Syk、凋亡相关微粒蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cleaved cysteinasparate protease-1,cleaved Caspase-1)和NLRP3蛋白表达。结果 与对照组和DSS组比较，DSS+白念珠菌组小鼠粪便培养出更多的白念珠菌（P<0.01）；结肠黏膜损伤程度严重（P<0.01）；结肠组织炎症因子IL-1β、IL-18水平明显升高（P<0.01）；结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达明显下降（P<0.05）；结肠组织NLRP3、NF-κB和Dectin-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,ASC、cleaved Caspase-1和Syk蛋白表达水平显著降低（P<0.05、0.01）。与DSS+白念珠菌组相比，BAEB组小鼠肠道白念珠菌显著减少（P<0.01）；结肠组织中IL-1β、IL-18水平下降（P<0.05、0.01）；结肠组织Occludin和ZO-1蛋白表达均显著升高（P<0.05、0.01）;BAEB低剂量组Syk蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;BAEB中剂量组ASC和Syk蛋白表达水平显著升高（P<0.05、0.01）,NLRP3和NF-κB蛋白表达水平显著降低（P<0.05、0.01）;BAEB高剂量组NF-κB蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,ASC蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论 BAEB可能通过抑制白念珠菌异常定植下Dectin-1/Syk通路所介导的NLRP3炎症小体过度活化，进而阻断IL-1β与IL-18的产生来发挥抗UC作用。