荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

被引：14

作者：

张玲

翟俊辉

周冬生

郭兆彪

毕玉晶

王津

杨瑞馥

机构：

[1] 军事医学科学院微生物流行病研究所

[2] 军事医学科学院微生物流行病研究所北京

[3] 北京

来源：

中国人兽共患病杂志 | 2005年 / 03期

关键词：

鼠疫耶尔森氏菌; 荧光定量PCR,标识序列,LightCycler;

D O I：

暂无

中图分类号：

R378.6 [巴斯德（Pasteur）氏杆菌属];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

目的　利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测。方法　采用SYBRGreenI随机掺入法 ,以Roche试剂盒为标准 ,比较两公司的DNA聚合酶 ,用鼠疫菌 310 0 4建立荧光PCR反应体系 ;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物 ,检测其灵敏度和特异性 ,以盲测试验进行验证 ;在此基础上鉴定 2 75株鼠疫耶尔森氏菌 ,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度。结果　建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系 ;EV76的检测灵敏度可达每反应体系 1.6个菌 ;检测我国 18个生态型共计 2 75株鼠疫耶尔森氏菌及 2 8株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明 ,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果 ,2 8株对照菌株均为阴性 ;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系 4 0 0 0个菌。结论　该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点 ,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测

引用

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共 7 条

[1] PCR检测鼠疫耶尔森氏菌研究进展 [J].