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SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台的建立
被引：14
作者：
陈英剑
胡成进
赵苗青
机构：
[1] 济南军区总医院实验诊断科
[2] 济南军区总医院实验诊断科 山东济南
[3] 山东济南
来源：
关键词：
SYBR Green;
实时荧光定量PCR;
技术平台;
D O I：
10.14172/j.cnki.issn1671-4008.2004.11.028
中图分类号：
R446.9 [其他];
学科分类号：
100208 ;
摘要：
目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液,40×H2O溶液稳定性好,最佳反应浓度为1∶10000。HBVDNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,最佳的MgCl2反应浓度4.0mmol,引物浓度0.5μmol,81℃时收集荧光信号。定量分析用标准曲线斜率为-3.32,相关系数为-0.994,误差为0.016。大鼠TGF-bate1表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,TGF-bate1和Bate-actin的最佳MgCl2反应浓度均为3.5mmol,引物浓度前者为0.8μmol,后者为0.5μmol,在87℃时收集荧光信号。靶基因TGF-bate1mRNA的相对量用下述公式计算:(1+Etgf)Ct1/(1+Eact)Ct2。结论初步建成了可检测DNA和mRNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。
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