三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响

被引：6

作者：

周文明

赵建龙

曹慧敏

张学军

机构：

[1] 安徽医科大学皮肤性病研究所、第一附属医院皮肤性病科,中国科学院上海微系统与信息技术研究所,中国科学院上海微系统与信息技术研究所,安徽医科大学皮肤性病研究所、第一附属医院皮肤性病科合肥,上海,上海,合肥

来源：

安徽医科大学学报 | 2003年 / 06期

关键词：

寡核苷酸; 杂交; 生物标记;

D O I：

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2003.06.007

中图分类号：

Q68 [物理因素对生物的作用];

学科分类号：

071011 [生物物理学];

摘要：

目的　观察标记引物法、随机渗入标记法、末端转移标记法三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响。方法　将淋球菌 gyrA基因 91位密码子突变型探针倍比稀释成终浓度为 10 0 0 μmol/L～ 0 2 5 μmol/L的梯度浓度点样并制作寡核苷酸芯片 ,PCR扩增荧光标记包含gyrA基因突变的目的DNA片段 ,与芯片杂交 ,分别记录三种标记方法的杂交信号强度。结果　标记引物法的荧光信号最强 ,随机渗入标记法的荧光信号强度次之 ,其Cy5 dUTP最佳浓度为0 1mmol/L(dTTP :Cy5 dUTP =10∶1) ,末端转移标记法反应时间在 6 0min和 12 0min时荧光信号值相近。点样的探针浓度达到 31μmol/L以上 ,荧光信号为平台期。结论　明确了三种荧光标记法对寡核苷酸芯片杂交信号的影响 ,有助于选择寡核苷酸芯片的荧光标记方法

引用

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