siRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响研究

被引：17

作者：

张梦 ^{[1
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王蕾 ^{[1
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焦金文 ^{[1
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张文华 ^{[2
]}

王黎明 ^{[1
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王菲 ^{[1
]}

姚如永 ^{[3
]}

机构：

[1] 青岛大学医学院附属医院妇科

[2] 青岛市中心医院妇科

[3] 青岛大学医学院附属医院中心实验室

来源：

中华肿瘤防治杂志 | 2014年 / 21卷 / 04期

关键词：

卵巢肿瘤; 基因沉默; RNA干扰; 耐药逆转; 核糖核苷酸小亚基M2;

D O I：

10.16073/j.cnki.cjcpt.2014.04.011

中图分类号：

R737.31 [卵巢肿瘤];

学科分类号：

100214 [肿瘤学];

摘要：

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)沉默对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP敏感性的影响。方法:采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3/DDP;将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOV3/DDP细胞,另设空白组和SKOV3/DDP-RRM2-neg(阴性组)做为对照;荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后各组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测RNAi对SKOV3/DDP细胞药物敏感性的影响。结果:成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3/DDP细胞,其耐药系数达到3.6,属低度耐药,但对吉西他滨(Gem)仍敏感。DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48h的IC50分别为(3.09±0.11)、(9.88±0.37)和(10.35±0.03)μg/mL,3者间差异有统计学意义,P<0.001。干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍,其RF为3.3。SKOV3/DDP-RRM2-RNAi 667(Ⅰ)组RRM2 mRNA水平下调为74.1%,P=0.010;SKOV3/DDP-RRM2-RNAi480(Ⅱ)组RRM2 mRNA水平下调为55.9%,P=0.016;SKOV3/DDP-RRM2-RNAi1179(Ⅲ)组RRM2mRNA水平下调为43.1%,P=0.001。其中,以转染Ⅰ组基因沉默率(82.33%)最高,P<0.001;阴性组(0.008 6%)与空白组(0.008 2%)比较,差异无统计学意义,P=0.133。转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量最低,Ⅰ组为0.062±0.006,Ⅱ组为0.314±0.002,Ⅲ组为0.123±0.002,与阴性组(0.715±0.034)和空白组(0.516±0.040)比较均明显降低,但以转染Ⅰ组细胞的蛋白相对表达量下降最明显,F=658.6,P=0.003 3。Gem和DDP联合作用72h时,转染组细胞凋亡率为(96±3.0)%,与其各组比较,差异均有统计学意义,P值均<0.001。结论:通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平,增加DDP耐药细胞的药物敏感性,并促进DDP诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡,在一定程度上逆转DDP耐药性;RNAi技术联合Gem及DDP作用可有效提高卵巢癌DDP耐药细胞的凋亡率,有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期患者一线治疗方案。

引用

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页数：7

共 11 条

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