绿色木霉(Trichoderma viride)基因组文库构建及其CBH I基因阳性克隆筛选

用绿色木霉核DNA部分酶解片段与噬菌体λEMBL3载体左右臂连接,并用高效价包装蛋白对重组分子进行体外包装,侵染宿主菌后,构建了含1.92×106个重组噬菌体的绿色木霉基因组文库。以李氏木霉纤维素酶CBH Ⅰ基因的5′、3′两个末端片段为探针,对所建立的基因组文库作轮回噬菌斑原位杂交,筛选到含绿色木霉CBH Ⅰ基因的阳性克隆7个,随机取其中三个克隆进一步用李氏木霉CBH Ⅰ、CBHⅡ基因的5′、3′四个末端片段探针作交叉斑点杂交,证明本实验确实克隆了很可能为全长的绿色木霉CBH Ⅰ基因,并提示CBH Ⅰ与CBHⅡ基因的末端序列之间不存在同源性。