苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达

被引：8

作者：

刘敬忠

向华

胡维

朱章菱

祝瑾

李氢元

机构：

[1] 首都医科大学附属北京红十字朝阳医院

[2] 中国科学院微生物研究所遗传室

来源：

生物工程学报 | 1998年 / 04期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

苯丙氨酸脱氨酶基因，基因表达，大肠杆菌，苯丙酮尿症;

D O I：

10.13345/j.cjb.1998.04.006

中图分类号：

Q789, [];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术从欧芹总ＲＮＡ分离制备了苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ，重组到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ及ｐＥＴ２３ｂ中，后者转化大肠杆菌ＪＭ１０９ＤＥ３获得ＰＡＬ的高效表达。插入片段两端共９２０ｂｐ的测序结果与文献符合率为９９７８％。工程菌细胞裂解液用ＳＤＳＰＡＧＥ（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分析显示在分子量７７ｋＤａ处有一条表达很强的蛋白区带，与ＰＡＬ亚基分子量相符，约占菌体总蛋白的１５％。用ＨＰＬＣ法检测到苯丙氨酸被ＰＡＬ脱氨的产物肉桂酸，且该ＰＡＬ酶活力特异性好，适于ＰＫＵ治疗之用。

引用

页码：34 / 38

页数：5