乙型肝炎病毒DNA转染与鸭乙型肝炎病毒DNA感染原代鸭肝细胞对比研究

目的　探讨HBVDNA复制和表达的跨种属特异性 ,为HBVDNA转染跨种属原代肝细胞模型的建立提供实践基础和理论依据。方法　分离培养原代鸭肝细胞 (PDH) ,电转线性HBVDNA(转染组 ,1.19× 10 12 拷贝 / 1× 10 7PDH)或急性感染DHBV (感染组 ,4× 10 8病毒颗粒 / 1× 10 7PDH) ,分别于转染 /感染后 1d、3d、5d等时点检测PDH培养上清或裂解液中HBsAg、HBeAg与DHBsAg (采用IMX系统或ELISA检测 ) ;并采用DotBlotting检测PDH裂解液中总HBVDNA。于转染 /感染后 2d提取PDH总DNA采用SouthernBlotting分析HBVDNA与DHBV复制型式。以单纯电击或未感染的PDH为对照组。结果　转染后 1d、3d和 5d各时点转染组PDH裂解液中HBsAg分别为 15 .2 4、14.5 5和5 13 (P/N值 ,阳性≥ 2 .1) ,HBeAg均为阴性 ;PDH培养上清中HBsAg与HBeAg均阴性 ;感染组各时点PDH上清中DHBsAg分别为 14.6、31.5 3、34.73(S/N值 ,阳性≥ 2 .1) ;上述各项指标于对照组均为阴性。DotBlotting显示转染组与感染组PDH各时点的裂解液中HBVDNA与DHBVDNA均为阳性 ,对照组为阴性 ;SouthernBlot分析显示 :转染组HBVDNA与感染组DHBV均为游离复制型 ,可见 4.0kb以下分子涂抹带 ,包括rcDNA、cccDNA(scDNA )和ssDNA等复制中间体 ;未见整合型HBVDNA 高分子区(4～ 2 4kb)