抑肽酶基因的克隆和表达

被引：4

作者：

高捷

谭树华

吴梧桐

机构：

[1] 中国药科大学生物制药学院

来源：

药物生物技术 | 2002年 / 02期

关键词：

抑肽酶; 融合表达; 复性;

D O I：

10.19526/j.cnki.1005-8915.2002.02.002

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

摘要：

抑肽酶作为天然的非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 ,临床用途广泛。为实现抑肽酶的大量制备 ,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成抑肽酶结构基因 ,克隆于PUC18的EcoRⅠ和PstⅠ位点 ,转入Top10大肠杆菌 (recA )中 ,经测序证明序列正确。表达体系模拟抑肽酶的体内成熟过程 ,将其自身的 13肽 pro序列融合于抑肽酶的N端 ,并在其间插入胰蛋白酶识别位点。该融合蛋白在使用PET 11C载体表达时 ,产物以包涵体形式存在于大肠杆菌中 ,表达量占菌体总蛋白的 30 %以上。复性实验证明 :该肽段不影响抑肽酶的正确折叠 ,还能帮助抑肽酶包涵体进行体外折叠 ,提高复性得率。复性后使用胰蛋白酶切割融合蛋白 ,可得天然构象的活性抑肽酶。

引用

页码：66 / 70

页数：5

共 6 条

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