测定生物样本中神经酰胺含量的HPLC-FLD法

目的:建立高效液相色谱-荧光检测器分析生物样本中的神经酰胺。方法:神经酰胺及预处理样本在1 mol·L-1氢氧化钾乙醇溶液中沸水浴反应2 h脱酰基,再与邻苯二甲醛衍生试剂反应60～90 s,采用Kromasil C18(250 mm×4.5 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(90∶10),流速1.0 mL·min-1,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为340 nm和455 nm,进样量50μL。结果:神经酰胺浓度在0.05～6.4μg·mL-1范围内与衍生物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),回收率为93.2%～107.5%,RSD<7.6%。结论:本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于生物样品中微量神经酰胺的检测。