湖北地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的分离、克隆和序列分析

采用加端聚合酶链反应技术，从湖北地区一宫颈癌患者癌组织ＤＮＡ中分离出人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７基因，并在ｐＵＣ１８载体中克隆。经限制性核酸内切酶分析和ＤＮＡ序列分析，确认了含ＨＰＶ１６Ｅ７重组克隆质粒，命名ｐＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ。ＤＮＡ序列分析表明，ＨＰＶ１６Ｅ７─ＨＢ基因全长２９４ｂｐ（与报道的标准株基因长度相同），但其核苷酸顺序中有两处发生了Ｃ→Ｔ突变，即第４３位密码子ＣＡＡ变为ＴＡＡ，第７６位ＣＧＴ变为ＴＧＴ；前者使谷氨酰胺密码子变为终止密码，即无义奕变（ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）。这种突变发生在２９４个碱基的ＤＮＡ扩增产物之中，不像是ＰＣＲ本身的错配，而很可能是湖北株与标准株之间的结构差异。