血小板生成素在毕赤酵母中的表达

被引：2

作者：

邢振兰

张红卫

郭树华

林泉

吴祖泽

机构：

[1] 山东大学生命科学院发育生物学研究所!山东济南,山东大学生命科学院发育生物学研究所!山东济南,中国军事医学科学院放射医学研究所!北京,中国军事医学科学院放射医学研究所!北京,中国军事医学科学院放射医学研究所!北京

来源：

山东大学学报(自然科学版) | 2001年 / 01期

关键词：

血小板生成素; 毕赤酵母; 基因重组; 诱导表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q782 [基因载体];

学科分类号：

摘要：

以人胎肝cDNA文库为模板 ,用PCR和DNA重组技术 ,将TPOcDNA克隆到pGEM○R T载体并测序 ,再将目的片段亚克隆到分泌型表达载体上获得重组质粒pPIC9K/TPO ,并通过PCR引物设计、扩增和DNA连接使毕赤酵母α 因子的信号肽序列取代TPO固有的信号肽序列 ,使之与毕赤酵母的α 交配因子(MFα)融合 ,该表达载体受AOX1强启动子的调控 .经电转化和G4 1 8筛选获重组酵母KM71 /pPIC9K/TPO ,并用甲醇进行诱导表达 .经甲醇诱导后 ,酵母重组子可高效分泌表达TPO .经SDS PAGE和WesternBlot分析 ,显示重组人TPO(rhTPO)分子量约为 65ku ,与文献报道的 68～ 85ku基本一致 ,表明该蛋白是经过正确加工和糖基化的蛋白 .薄层扫描分析显示 ,重组蛋白占菌体分泌总蛋白的1 0 .1 4% .由此表明我们用毕赤酵母 (Pichiapastoris ,Pp)表达体系成功地表达了TPO .

引用

页码：90 / 94

页数：5

共 6 条

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