腺病毒介导的反义c-myc选择性诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡的研究

目的　构建介导反义ｃ ｍｙｃ 的重组腺病毒，研究其对人肺腺癌细胞的细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法　将ｃ ｍｙｃ 基因反向克隆于穿梭质粒载体ｐ Ａｄ Ｃ Ｍ Ｖ 中，通过脂质体与ｐ Ｊ Ｍ１７ 共转染２９３ 细胞，经同源重组产生编码反义ｃ ｍｙｃ 的重组腺病毒。体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系 Ｇ Ｌ Ｃ ８２ 和 Ｓ Ｐ Ｃ Ａ １ 以及人胚肺二倍体细胞２ Ｂ Ｓ后，细胞周期的改变、凋亡的发生和相关基因表达的变化；体内观察对肿瘤细胞致瘤能力和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。结果　构建并扩增、纯化得到编码反义ｃ ｍｙｃ 的重组腺病毒 Ａｄ Ａ Ｓｍｙｃ，滴度达３３ ×１０１０ 噬斑形成单位（ｐｆｕ）／ｍｌ。肿瘤细胞感染 Ａｄ Ａ Ｓｍｙｃ ３ ～５ 天后，逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 分析显示ｃ ｍｙｃ 基因表达下调；同时出现了明显的 Ｇ１ 期阻滞和凋亡， Ｇ１ 期正调控基因ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 表达下调，凋亡相关基因ｂｃｌ ２ 和ｂａｘ基因的表达分别出现下调和上调；人胚肺二倍体细胞感染 Ａｄ Ａ Ｓｍｙｃ 后无上述变化。肿瘤细胞体外克隆形成能力和裸鼠皮下移植瘤生长被 Ａｄ Ａ Ｓｍｙｃ 抑制。结论　反义