Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1共转染人退变椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响

被引：16

作者：

顾海伦 ^{[1
]}

刘莉 ^{[2
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王欢 ^{[1
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段景柱 ^{[1
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李建军 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国医科大学附属盛京医院骨二科

[2] 中国医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室

来源：

生物医学工程与临床 | 2009年 / 13卷 / 01期

关键词：

椎间盘; 骨形态发生蛋白-2; 转化生长因子-β1; 基因转染;

D O I：

暂无

中图分类号：

R681.53 [];

学科分类号：

摘要：

目的探讨骨形态发生蛋白腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)和转化生长因子-β1腺病毒表达载体(Ad-TGF-β1)共转染人退变椎间盘髓核细胞后对aggrecan和Ⅱ型胶原合成的影响。方法人退变椎间盘髓核细胞体外分离培养至第2代。为检测转入目的基因后蛋白表达情况,将其分为空白对照组、目的基因组和共转染组,细胞分别转染Ad-BMP-2(50MOI)、Ad-TGF-β1(50MOI)及共转染(各50MOI),再用Western blot方法检测转染后细胞目的蛋白的表达;为探讨目的基因对细胞外基质代谢的影响,将研究对象分为空白对照组(A组)、Ad-BMP-2100MOI(B组)、Ad-TGF-β1100MOI(C组)、Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1各50MOI(D组),用ELISA法分别检测转染第3天和第6天细胞上清液中aggrecan和Ⅱ型胶原的蛋白表达量。RT-PCR检测第6天髓核细胞内Ⅱ型胶原和aggrecan的mRNA的表达水平。应用方差分析比较组间差异,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果在转染目的基因载体后,目的蛋白表达增加。在转染后第3天和第6天各转染组细胞培养基中aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组(P<0.01),与转染单个基因组相比,共转染组的aggrecan和Ⅱ型胶原蛋白表达量明显增加(P<0.01);并且在转染后第6天共转染组髓核细胞内aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA表达也明显增加(P<0.01)。结论转染Ad-BMP-2、Ad-TGF-β1能促进aggrecan和Ⅱ型胶原合成,同时上调aggrecan和Ⅱ型胶原mRNA的表达;共转染Ad-BMP-2和Ad-TGF-β1对细胞外基质的mRNA和蛋白合成有协同作用。

引用

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页数：4

共 8 条

[1]

Biologic response of human intervertebral disc cells to gene therapy cocktail [J].

Moon, Seong-Hwan ;

Nishida, Kotaro ;

Gilbertson, Lars G. ;

Lee, Hwan-Mo ;

Kim, Hyang ;

Hall, Ronald A. ;

Robbins, Paul D. ;

Kang, James D. .

SPINE, 2008, 33 (17) :1850-1855

[2]

Efficient and stable gene expression in rabbit intervertebral disc cells transduced with a recombinant baculovirus vector [J].

Liu, XY ;

Li, KH ;

Song, JH ;

Liang, CY ;

Wang, XY ;

Chen, XW .

SPINE, 2006, 31 (07) :732-735

[3]

Quantitative analysis of gene expression in a rabbit model of intervertebral disc degeneration by real-time polymerase chain reaction.[J].Satoshi Sobajima;Adam L. Shimer;Robert C. Chadderdon;John F. Kompel;Joseph S. Kim;Lars G. Gilbertson;James D. Kang.The Spine Journal.2005, 1

[4]

In vivo bioluminescent imaging of virus-mediated gene transfer and transduced cell transplantation in the intervertebral disc [J].