粉尘螨Ⅱ类抗原(Derf2)的cDNA克隆测序及亚克隆

目的　获得粉尘螨Derf 2cDNA克隆及亚克隆 ,并进行测序。方法　设计合成引物 ,从粉尘螨螨体中提取RNA ,经RT -PCR获得cDNA ,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至 pMD - 18T ,转化大肠杆菌E coliJM10 9,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序 ,将PCR筛检阳性重组子及pET - 32a(+)表达载体分别用SacⅠ和NotⅠ双酶切 ,连接转化至E coliCompe tentCellJM 10 9中过夜培养 ,挑选菌落进行酶切鉴定。结果　从粉尘螨基因组RNA中扩增出Derf 2cDNA片段 ,成功构建pET - 32a(+) -Derf 2亚克隆 ,酶切产物的大小与预期相符。 结论　成功地对粉尘螨Derf 2cDNA进行体外扩增并构建pET - 32a(+) -Derf 2亚克隆。