香菇酸性蛋白酶纯化及其动力学

香菇酸性蛋白酶在 pH 3.5的条件下提取最佳,提取液经 DEAE-Sephadex A50和Sephadex G75层析可以得到纯酸性蛋白酶,用 SDS 凝胶电泳和 Sephadex G200凝胶过滤法可测得该酶是由分子量为40 000道尔顿的单亚基所组成。Mn2+对该酶具有正协同性激活作用,Hill 系数为2.62,其活性中心与天门冬氨酸残基有关,自由酶的 pKa 为3.1,与底物结合后转移到2.5。S-PI 对该酶表现出可逆的抛物线型竞争抑制,它和酶有2个以上的结合位点。