Delta4的功能性研究及与其他Notch配体的比较

目的:探讨Delta4基因在Notch传导机制中的作用。方法:构建pTracer.CMV.Delta4.FLAG载体,瞬时转染COS7细胞、稳定转染CHO细胞,筛选高表达Delta4的稳定CHO细胞系。用Luciferase分析,观察并比较Delta4对Notch1-CHO及Notch2-CHO两个宿主细胞的信号功能活性,与Delta1、Jagged1及Jagged2比较,从而对此基因定性并获知其信号功能活性水平。结果:Western-blot证实pTracer.CMV.Delta4.FLAG可瞬时转染COS7细胞及稳定转染CHO细胞,并根据Delta4蛋白表达条带的强弱筛选高表达Delta4-CHO细胞系。Delta4对Notch1及Notch2均具有信号功能活性,且对后者的活性功能水平大于前者。对Notch1,Delta4的功能活性略低于Jagged2,但高于Delta1及Jagged1;对Notch2,Delta4的功能活性低于Delta1、Jagged1及Jagged2,但亦具有较强的活性水平。结论:建立的Delta4-CHO细胞系功能稳定,Delta4为Notch1及Notch2的配体,且对Notch2的活性水平高于Notch1。