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减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达新城疫病毒融合蛋白
被引：11
作者：
方维焕
梁雪芽
机构：
[1] 浙江大学动物预防医学研究所
[2] 浙江大学动物预防医学研究所 杭州
[3] 杭州
来源：
基金：
浙江省自然科学基金;
关键词：
新城疫病毒(NDV);
融合蛋白(F);
减毒沙门氏菌;
DNA疫苗载体;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q786 [基因的表达];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
RT PCR扩增了新城疫病毒 (NDV)F4 8E9株的融合蛋白 (F)基因并插入到 pcDNA3的CMV启动子下游 ,构建成真核表达质粒pcDNA3 F ,高压电转化dam和 phoP基因双突变株减毒鼠伤寒沙门氏菌 (ZJ111株 ) ,并直接感染Vero细胞 ,分别提取细胞总DNA和总RNA ,DIG标记探针均可检测到阳性杂交信号。FITC标记的羊抗鸡IgG进行间接免疫荧光试验 ,可检测到特异性的黄绿色荧光。ELISA检测F蛋白结果表明 ,转染后 4 8h开始表达 ,随后逐渐增多。SDS PAGE和Western印迹可检测到 5 5kD的蛋白质条带。上述试验结果证实减毒沙门氏菌不仅可将目的基因呈递给Vero细胞 ,而且还得到了转录和表达 ,表达的F蛋白具有免疫反应性 ,为研制减毒沙门氏菌为载体的口服NDVDNA疫苗创造了条件。
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