节杆菌BT801N-氨甲酰氨基酸水解酶基因的克隆与表达

被引：6

作者：

郝淑凤

张惟材

李迎丽

袁红杰

黄留玉

机构：

[1] 军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所,军事医学科学院生物工程研究所北京,中国科学院沈阳应用生态研究所,沈阳,北京,北京,北京,北京

来源：

生物工程学报 | 2003年 / 02期

关键词：

N-氨甲酰氨基酸水解酶; 基因表达; 苯丙氨酸;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

通过PCR从质粒pUC18 16 9中扩增得到N 氨甲酰氨基酸水解酶基因 (hyuC) ,置于原核表达载体pQE6 0的T5启动子下游构成表达质粒pQE6 0 hyuC ,并在大肠杆菌M15中实现了该基因的高表达。SDS PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 44kD处有一表达带 ,经薄层扫描分析目的蛋白占全菌蛋白的 40 % ,主要以可溶性形式存在。酶活性分析结果表明 ,工程菌M15 pQE6 0 hyuC的N 氨甲酰氨基酸水解酶的比活分别比原始菌株ArthrobacterBT80 1和亚克隆DH5α pUC18 16 9提高了 5 2倍和 72倍。在节杆菌BT80 1和大肠杆菌DH5α pUC18 16 9的反应体系中加入等量菌体的工程菌M15 pQE6 0 hyuC ,可使乙内酰脲酶总比活分别提高 8 1倍和 3 0倍。

引用

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