青稞脱水素基因dhn4的克隆与原核表达

被引:12
作者
杜俊波
席德慧
王尚英
冯鸿
孙歆
袁澍
王建辉
刘自礼
薛立微
林宏辉
机构
[1] 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室
关键词
青稞; 脱水素; 克隆; 原核表达; 纯化;
D O I
暂无
中图分类号
S512.3 [大麦];
学科分类号
0901 ;
摘要
用RT-PCR的方法从重要的高原作物青稞(Hordeum vulgareL.var.nudumHook.f.)中克隆到了脱水素基因dhn4,其编码区长为678 bp,所编码的蛋白质DHN4为YSK2型脱水素.经预测,该蛋白二级结构易形成α-螺旋,并无固定的三级结构.将dhn4基因cDNA编码区定向克隆到载体PET30-c上,获得了重组质粒PET-dhn4,该重组质粒再转化到大肠杆菌BL21菌株,37℃经1.5 mmol/L IPTG诱导获得了大量分子量约为35 kD的融合蛋白.然后用亲和层析的方法对该蛋白进行纯化,得到了纯化的脱水素DHN4蛋白.
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