Digoxigenin-11-dUTP标记寡核苷酸探针的方法及其初步应用(论著摘要)

<正> 用多聚酶链反应（PCR）将DNA序列进行特异性扩增,继而用序列特异性寡核苷酸（SSO）探针进行杂交,这一技术已成为详细分析基因变异的强有力手段。基因的传统检测方法是用a-32p ATP在已知DNA片段5’末端进行磷酸化标记制成寡核苷酸探针进行杂交分析。但是,由于放射性同位素的半衰期短,价格昂贵,具有辐射损伤,且实验周期长,因而限制了杂交技术的应用。因此,建立一种不依赖于同位素而又具有相当高的灵敏度,操作简单、快速且稳定的非放射性基因检测方法十分必要。本实验以非同位素DIG-11-d UTP 3’末端酶促标记人工合成的18bp寡核苷酸。其25μl标记体系含SSO 30 pmol、1mmol/L DIG—11-dUTP 2.5μl、TDTase20U、5×TDT缓冲液5μl,37℃温育60min,以SephadexG-25纯化DIG标记物,终浓度1.2 pmol/μl,放-20℃备用。选择标准DNA样