适于双向电泳分析的番茄叶片总蛋白提取方法的优化

被引：30

作者：

徐幼平 ^{[1
]}

徐秋芳 ^{[2
]}

蔡新忠 ^{[2
]}

机构：

[1] 浙江大学分析测试中心

[2] 浙江大学生物技术研究所植物保护系

来源：

浙江农业学报 | 2007年 / 02期

关键词：

番茄; 蛋白; 双向电泳; 三氯乙酸; 两性电解质; 超声处理;

D O I：

暂无

中图分类号：

S641.2 [番茄（西红柿）]; Q946.1 [蛋白质];

学科分类号：

摘要：

比较了三氯乙酸(TCA)、酚和十二烷基硫酸钠(SDS)3种提取方法在所获番茄叶片总蛋白产量及其在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率等方面的区别,并对3种蛋白溶解液以及超声处理在蛋白质溶解中的作用进行了分析探讨。结果表明,TCA提取法最佳,该方法提取番茄叶片总蛋白的得率最高、所获蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目最多,最清晰;酚法次之;SDS法最差。由离液剂和去污剂组成的蛋白溶解液复溶蛋白沉淀所获蛋白产量显著高于Tris-NaCl溶解液。还原剂和两性电解质以及超声处理显著增进蛋白质的溶解,提高蛋白产量。采用TCA提取法获得蛋白沉淀,再以溶解液Ⅱ(7 mol/L尿素,2 mol/L硫尿,2%CHAPS,2%SB3-10,65 mmol/L DTT,0.2%两性电解质)溶解,结合超声助溶的方法体系可以获得高得率和高电泳分辨率的番茄叶片总蛋白样品,该方法适用于双向电泳分析等下游操作。

引用

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