培养条件对三叶青愈伤组织生长及总黄酮含量的影响

研究培养条件对三叶青愈伤组织生长及黄酮积累的影响,建立用愈伤组织生产三叶青黄酮的方法。以三叶青的叶诱导产生的愈伤组织为材料,分别采用单因素实验、正交实验的方法比较了不同光照周期、不同有机添加物、不同前体、3种基础培养基、不同6-BA与NAA浓度的培养条件下愈伤组织生长的情况及黄酮含量。用愈伤组织生产三叶青黄酮可采用两步培养法来进行:先在促进愈伤组织生长的最佳处理组合条件:12 h/d间断性光照、MS+3.0 mg/L6-BA+2.0 mg/L NAA+2 g/L蛋白胨下培养30 d,再转入最利于黄酮积累的处理组合:连续光照、B5+4.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+40 mg/L苯丙氨酸下培养20 d。采用该方法培养的愈伤组织中总黄酮最大浓度可以达到28.4±3.9 mg/g DW。采用愈伤组织培养方式生产三叶青黄酮,不仅可以大大地缩短生产周期,而且培养物中的总黄酮含量也明显高于原植株叶片,接近于根茎中的黄酮含量,具有较大的可行性。