应用无支架离心管培养技术构建组织工程化关节软骨

目的 探索应用离心管培养技术进行体外构建组织工程化关节软骨组织的可行性，并研究其结构和功能。方法 分离培养人胚胎关节表层软骨细胞，在无支架材料条件下，用离心管培养技术构建关节软骨，通过组织学、生物化学和逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)技术，对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态研究。结果 在体外培养第 2周时，组织切片可见软骨样组织结构；第 3周时软骨发育趋于成熟，经阿新蓝染色基质丰富；第 16周时，组织形态无明显变化，未见钙化。 DNA含量在体外培养第 2周时达最高峰，其硫酸化糖胺多糖 (GAG)含量在第 4周时达最高峰，维持至第 8周。 GAG与 DNA含量之比于第 8周时达最高峰。 RT-PCR检测结果显示，体外培养至第 16周时，Ⅱ 型胶原蛋白 mRNA呈阳性表达，其扩增片段为 160 bp，与正常人的胚胎关节软骨一致。结论 在无支架材料条件下，采用离心管培养技术培养的人胚胎关节表面软骨细胞可以构建组织工程化关节软骨，而且接近正常关节软骨的形态和功能。