人源性抗HBsAg抗体Fab段噬菌体呈现文库的构建、筛选及阳性克隆核苷酸序列测定

目的 :构建一个经HBsAg主动免疫的人lgG1抗体噬菌体展示文库 ,通过特异的淘筛 (panning)获得与HBsAg有较高亲和力的Fab抗体 ,并测定其编码序列。方法 :从一经乙肝疫苗免疫的自愿者的外周血分离淋巴细胞提取RNA ,逆转录合成cDNA。PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物克隆进载体pComb3H相应的位点 ,构建成噬菌体呈现库 ,并以HBsAg包被的 96孔板对抗体库进行 3轮淘筛 ,将所获克隆分别与HBsAg进行ELISA反应 ,挑取显色大于对照 2 0倍以上的阳性克隆进行DNA测序。结果 :lgG1的Fd段和κ轻链cDNA得到扩增 ,构建了一实际库容量为 1 8× 10 5 的噬菌体呈现文库。通过特异性淘筛 ,获得与HBsAg有较高新合力的 3株Fab抗体并测定其编码序列。DNA序列测定结果表明 ,3株抗体中两株的Fd段完全一样 ,且 3株的轻链完全一样。结论 :成功构建了一个经HBsAg抗原免疫的人源抗体Fab段噬菌体抗体库 ,筛选得到了 3株特异性抗体的Fab片段。