缺氧环境中黏着斑激酶对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

被引：4

作者：

晏维 ^{[1
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田德安 ^{[1
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付妤 ^{[2
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廖家智 ^{[1
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夏丽敏 ^{[1
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罗敏 ^{[1
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朱倩 ^{[1
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机构：

[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科

[2] 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科

来源：

中华肝脏病杂志 | 2009年 / 04期

关键词：

癌; 肝细胞; 黏着斑激酶; RNA干扰; 缺氧;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100112 [医学生物化学与分子生物学];

摘要：

目的研究缺氧对人肝癌细胞SMMC-7721黏着斑激酶（FAK）表达的影响以及FAK表达对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法通过1%体积分数O2的低氧培养建立人肝癌细胞SMMC-7721物理缺氧模型,Western blot检测FAK的表达。构建针对FAK mRNA的干扰质粒pshRNA-FAK及阴性对照质粒pGensil-2,并将其转染至SMMC-7721细胞,G418筛选稳定转染细胞株。Western blot检测FAK蛋白表达的变化,细胞迁移和侵袭实验检测缺氧条件下细胞迁移和侵袭能力的改变。在正常条件下将FAK真核表达质粒pcDNA3-FAK转染至SMMC-7721细胞,观测其侵袭能力的改变。根据数所资料的不同分别采用t检验、单因素方差分析、LSD法及Dunnett法进行统计学处理。结果低氧培养的SMMC-7721细胞FAK蛋白表达水平逐渐升高,24h后较0h时明显升高（P<0.01）。SMMC-7721细胞稳定转染pshRNA-FAK后,FAK蛋白表达显著下降,抑制率达74.6%±5.1%,在正常及缺氧条件下都对FAK表达有显著抑制作用。细胞迁移实验结果显示,缺氧显著促进SMMC-7721细胞迁移能力（t=18.66,P<0.01）,侵袭实验结果与迁移实验结果一致。转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞在缺氧环境中的迁移能力有显著抑制作用,透膜细胞数（353±36）个较对照组（392±31）个明显降低（F=173.983,P<0.05）;细胞侵袭实验显示,转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞侵袭能力有显著抑制作用,透膜细胞数（160±12）个较对照组（194±13）个明显降低（F=59.674,P<0.05）。同时转染真核表达质粒pcDNA3-FAK显著促进SMMC-7721细胞侵袭能力。结论缺氧促进SMMC-7721细胞侵袭可能与FAK表达水平升高相关,FAK表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞侵袭转移的机制之一。

引用