猪γ-干扰素双顺反子表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

被引：21

作者：

曹瑞兵

蔡梅红

陈德胜

陈溥言

机构：

[1] 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

[2] 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京

[3] 江苏南京

来源：

中国兽医学报 | 2004年 / 01期

关键词：

猪γ-干扰素; 基因克隆; 双顺子表达; 活性测定;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.2 [家畜生理学、生物物理学、生物化学];

学科分类号：

090507 [智慧养殖与动物生产学];

摘要：

提取经 Con A诱导培养的猪外周血白细胞总 RNA,RT- PCR扩增出猪 IFN- γ基因并克隆到 p GEM- T- easy载体 ,测序结果表明 ,扩增片段为含有信号肽的猪 IFN-γ完整基因。亚克隆猪 IFN-γ成熟蛋白编码基因 ,并对其 5′段前 2个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造。通过引入 SD序列 ,成功构建了猪 IFN- γ原核双顺反子表达载体 p L CS-po IFN2 G,并实现了猪 IFN-γ在大肠杆菌中的高表达 ,约占菌体总蛋白的 5 6 .5 %。表达产物以包涵体形式存在 ,用含 7mol/L 盐酸胍的变性液溶解及含 0 .5 mol/L盐酸胍复性液复性处理 ,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后 ,细胞病变抑制法测定结果表明 ,重组猪 IFN-γ具有较高干扰素活性

引用

页码：52 / 55

页数：4

共 4 条

[1]

The correlation of virus-specific interferon-gamma production and protection against classical swine fever virus infection[J] Sanipa Suradhat;Manakant Intrakamhaeng;Sudarat Damrongwatanapokin Veterinary Immunology and Immunopathology 2001,

[2]

IFNγ inhibits porcine reproductive and respiratory syndrome virus replication in macrophages[J] E. M. Bautista;T. W. Molitor Archives of Virology 1999,

[3]

分子克隆实验指南[M] [美]萨姆布鲁克(Sambrook;J·)等著;金冬雁等译科学出版社 1992,

[4]

The use of gamma-inter-feron for the prevention and treatment of infectious dis-eases in piglets and calves Kishko I H;Vasylenko M I; Mikrobiol Z 1999,

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