黄芪甲苷对脂多糖诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及机制研究

目的研究黄芪甲苷对脂多糖（LPS）诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及有关机制。方法采用LPS不同浓度(0.25、0.5、1、1.5、2μg·mL-1)及时间（15、30、45、60、120 min）诱导GES-1细胞炎症反应,筛选LPS诱导的合适浓度、时间。将GES-1细胞分为空白对照组、模型组及黄芪甲苷0.1、1、10μg·mL-1浓度组;黄芪甲苷预处理2 h后,以筛选出的LPS浓度、时间诱导GES-1细胞。采用MTS法检测细胞存活率;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）的含量;采用RT-qPCR法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、环氧合酶2（COX-2）mRNA的表达;采用Western Blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路相关蛋白（Erk、Jnk/SAPK、P38 MAPK）的磷酸化水平。结果选择0.25μg·mL-1及30 min作为LPS诱导GES-1细胞炎症模型的浓度及时间。黄芪甲苷浓度≤100μg·mL-1时对GES-1细胞存活率无明显影响。与空白对照组比较,模型组细胞的炎症因子IL-6水平明显升高（P<0.01）,iNOS、COX-2 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,p-P38、p-Jnk、p-Erk蛋白表达明显上调（P<0.001）。与模型组比较,0.1、1、10μg·mL-1不同浓度黄芪甲苷组的细胞IL-6水平均明显降低（P<0.01）,iNOS及COX-2(10μg·mL-1浓度组)mRNA表达均明显下调（P<0.01）,p-P38(1、10μg·mL-1浓度组)及p-Jnk(0.1、10μg·mL-1浓度组)、p-Erk(0.1、10μg·mL-1浓度组)蛋白表达均明显下调（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。结论黄芪甲苷可能通过抑制MAPK信号通路的激活来抑制LPS诱导的GES-1细胞炎症相关因子产生,从而发挥抗炎作用。