hIL-7-GM-CSF(7-127)融合蛋白的构建和E.coli表达

被引：11

作者：

吴秋茜

姜宇飞

陈慰峰

钱晓萍

舒翠玲

沈倍奋

机构：

[1] 北京医科大学免疫系Ｔ细胞研究室

[2] 北京军事医学科学院基础医学研究所

来源：

中华微生物学和免疫学杂志 | 1998年 / 01期

关键词：

白细胞介素-7,融合蛋白,粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子,大肠杆菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392.12, [];

学科分类号：

摘要：

目的将ｈＩＬ－７基因与ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）基因通过一中间接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接到一起，并在大肠杆菌中表达具有ｈＩＬ－７活性和极高ｈＧＭ－ＣＳＦ活性的ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合分子。方法通过引物设计和采用分级克隆的策略构建原核表达载体ｐＢＶ２２０－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７），并在大肠杆菌中表达ｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合蛋白。连接ＩＬ－７与ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的中间接头为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３。通过选择密码子，在（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ｃＤＮＡ的中后部产生了一个ＢａｍＨⅠ位点，ＧＧＡ编码Ｇｌｙ，ＴＣＣ编码Ｓｅｒ。ＩＬ－７下游引物和ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）上游引物的合成均起始于该位点。结果ｐＵＣ１８－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）序列测定表明，ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）以及中间接头序列均与设计一致。活性测定结果表明，ｒｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的ｒｈＩＬ－７比活性约为１．６×１０６Ｕ／ｍｇ，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）比活性约为５×１０９～１×１０１０Ｕ／ｍｇ，比ｒｈＧＭ－ＣＳＦ标准品高５００～１０００倍。结论在ＩＬ－７－ＧＭ－Ｃ

引用

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