基于mTORC1/4EBP1信号通路探讨银盏心脉滴丸对缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞线粒体功能的影响

目的观察银盏心脉滴丸对大鼠心肌细胞(H9C2)mTORC1/4EBP1信号通路的影响以探讨其对线粒体功能的机制。方法制备银盏心脉滴丸含药血清。将细胞分为对照组、模型组(缺氧/复氧)、空白血清组及银盏心脉滴丸含药血清组。制备缺氧/复氧细胞损伤模型,利用激光共聚焦检测线粒体膜电位(ΔΨm),利用流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species, ROS),运用Western Blot技术检测细胞雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、真核翻译起始因子4E结合蛋白(eukaryotic translation initiation factor 4E-binding proteins,4E-BP)、mTOR复合体蛋白(regulatory-associated protein of mammalian target of rapamycin,Raptor)蛋白表达,运用q-PCR方法检测mTORC1、4EBP1、Raptor的mRNA含量。结果与对照组相比,模型组细胞内绿色荧光增强,ΔΨm显著高于对照组(P<0.05);而与模型组相比,银盏心脉滴丸组红色荧光增强(P<0.05),说明银盏心脉保护ΔΨm稳定,保护线粒体膜结构;与对照组相比,模型组的ROS合成较对照组升高(P<0.05);而与模型组相比,银盏心脉滴丸组细胞内ROS产生明显降低(P<0.05);与对照组相比,模型组mTOR、Raptor基因mRNA水平下调(P<0.05),4ebp1基因mRNA水平上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,银盏心脉滴丸组mTOR、Raptor基因mRNA水平上调(P<0.05),4ebp1基因mRNA水平下调(P<0.05)。结论银盏心脉滴丸改善缺氧复氧损伤的机制可能是通过激活mTORC1/4EBP1信号通路,从而抑制线粒体膜电位,改善活性氧,保护线粒体功能。