改进Tripure法提取鉴定小鼠组织总RNA

目的改进从新鲜动物组织提取、鉴定纯度及完整性较高总RNA的技术方法。方法实验于2005-05-16/08-25在解放军第三军医大学大坪医院创伤分子生物学实验室进行。用健康4～6周龄昆明种小鼠70只,颈椎脱臼法处死,取肺组织约100mg。在TripureIsolation试剂说明书基础上,对提取组织RNA的操作步骤进行调整改进,包括:①迅速组织取材,可不将组织切割成碎块而直接中速匀浆。②匀浆头夹层每次使用前后一定要彻底清洗干净;新鲜组织使用5mL离心管匀浆。③吸取含RNA的三相分层上清液时,吸取250μL即可。④RNA沉淀后,用无水乙醇再洗1次。并对常规琼脂糖凝胶电泳做适当改进用于鉴定RNA的质量,改进的电泳方法:①电泳RNA所用器械均用肥皂水、体积分数为0.03的H2O2清洗2遍,1g/L焦碳酸二乙酯处理的灭菌双蒸水冲洗,室温晾干备用。②用新配的0.5×TBE配制10g/L琼脂糖凝胶,倒胶时Goldview核酸染料直接加入凝胶中。③琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经灭菌的0.5×TBE。电泳电压5V/cm,电泳时间1.5h后凝胶成像系统拍照记录。结果①取提取的总RNA5μg进行电泳1.5h后,可见28S,18S,5S3条清晰的RNA条带,其中28S条带的亮度约为18S条带的2倍,5S条带隐约可见。②用该法提取的新鲜组织RNA,经电泳鉴定及反转录-聚合酶链反应检测,显示RNA的纯度及模板性较好。全部操作过程可在2.5h内完成。结论用改进方法提取的新鲜组织RNA质量稳定,电泳鉴定快速可靠。