加工番茄CAPS遗传标记反应体系的优化

【目的】以加工番茄M82、IL7-5为材料,研究加工番茄CAPS分析中PCR反应体系的主要成分对CAPS扩增结果的影响。【方法】以公开发表并检验稳定的CAPS标记C2at5g20180为引物,PCR反应采用25μL反应体积,含模板DNA 100 ng,2.5 U raq DNA聚合酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,0.15μmmol/L引物。在保持其它因素一致的条件下,通过5个梯度,变化单一因子,筛选最优参数。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性40 s,55℃退火40 s,72℃延伸90 s,共37个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存产物。【结果】通过体系优化,成功扩增出清晰稳定的PCR产物。【结论】在总体积为25μL的PCR反应中,含50 ng模板DNA,0.75 U Taq DNA聚合酶,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L,dNTP浓度为0.16 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L时效果最好。