牛分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

被引：6

作者：

姜秀云

王春凤

王春芳

何昭阳

机构：

[1] 吉林农业大学生物技术学院

[2] 吉林农业大学动物科技学院

[3] 吉林农业大学动物科技学院吉林长春

[4] 长春吉林

来源：

中国预防兽医学报 | 2005年 / 06期

关键词：

牛分枝杆菌; MPB70基因; 克隆; 原核表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

本研究以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,以MPB70成熟蛋白基因特异性引物进行PCR扩增,获得约500 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-70。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pGEM-T-70和pET28a(+),并将纯化的MPB70基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-70。将pET28a-70转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约25 Ku外源蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究MPB70的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础。

引用

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